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小鼠心肌细胞的冻存方法和常见问题解决办法介绍

更新时间:2021-09-27点击次数:1041
  小鼠心肌细胞已广泛用于成熟心肌细胞离子通道、蛋白免疫化学、心肌病及心肌梗塞等模型的实验研究中,不仅在结构和功能上更接近在体细胞,并且成熟心肌细胞的体外培养模型可以排除成纤维细胞对实验结果的干扰。
  心脏由心肌细胞和间质细胞组成,心肌细胞占心脏总体积的75%,但细胞数仅占心脏细胞总数的1/3,出生后心肌细胞丧失增值能力,是高度分化的终末细胞,主司收缩功能。间质细胞由成纤维细胞、血管平滑肌细胞、神经细胞及巨噬细胞等组成,成纤维细胞占间质细胞90%以上,成纤维细胞具有分泌功能,合成和分泌生物活性物质,调节自身胶原的产生及周围心肌细胞的形态结构和生理功能。
  心肌细胞按生理功能分为两类:一类为工作细胞,包括心房肌及心室肌,胞浆内含有大量肌原纤维,因而具有收缩功能,主要起机械收缩作用。除此以外,还具有兴奋性、传导性而无自律性。另一类为特殊分化的心肌细胞,包括分布在窦房结、房间束与结间束、房室交界、房室束和普肯耶纤维中的一些特殊分化的心肌细胞,胞浆中没有或很少有肌原纤维,因而无收缩功能,主要具有自律性,有自动产生节律的能力,同时具有兴奋性、传导性。
  一、小鼠心肌细胞冻存方法
  1.消化并离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞;
  2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管;
  3.将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜;
  二、常见问题及解决方案
  1、培养瓶有破裂,培养液有漏液:可能会污染,所以我们会及时解决。
  2、细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养。