在细胞培养、生物制药、科研实验等领域，支原体污染是贯穿全流程的隐形隐患，不仅会干扰细胞生长状态、篡改实验数据，还会影响生物制品质量与实验结果可靠性。传统支原体检测方法多依赖PCR仪、电泳仪、荧光显微镜等精密设备，操作繁琐、耗时长、易出现假阳性，且需专业人员操作，难以满足快速筛查、日常质控的需求。针对行业痛点，这款支原体检测试剂盒依托创新显色检测技术，实现了极简操作、极速出结果、超高灵敏度的检测突破，成为细胞培养支原体筛查的高效解决方案。
一、生物试剂特色：兼顾便捷性与精准性
本试剂盒摒弃传统检测的复杂流程与设备依赖，以四大核心优势，打造适配基层实验室、常规质控的高效检测工具，全面解决传统方法的操作壁垒与结果误差问题。
-设备零门槛，无需核酸提取：检测全程仅需1μl培养细胞上清液和1台常规水浴锅，告别基因组DNA提取步骤，无需荧光显微镜、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、生物发光检测仪等复杂实验设备，普通实验室均可开展检测，大幅降低实验成本与场地要求。
-极速检测，1小时出结果：突破传统检测数小时甚至数天的时长瓶颈，全程孵育仅需60分钟即可完成检测，实现样本快速筛查，尤其适合细胞传代前、样本入库前的紧急质控，不耽误实验进度，提升科研与生产效率。
-一步操作，肉眼直观判读：全程仅需单步加样与孵育操作，无需多步开盖、电泳分离等环节，实验结果通过反应液颜色变化直接肉眼辨别，操作极简且大幅降低多步操作开盖带来的气溶胶污染、假阳性风险。检测时以白纸为背景，光线充足环境下即可清晰区分阴阳性，无需专业判读经验。
-超高灵敏度，覆盖主流污染株：检测灵敏度远超常规PCR法，可精准识别微量支原体污染，针对性覆盖细胞培养中98%的常见污染支原体，包括猪鼻支原体、精氨酸支原体、口腔支原体、莱氏无胆甾原体、发酵支原体、唾液支原体、人型支原体、梨支原体等，检测谱广、特异性强，杜绝漏检风险。
二、试剂盒规格与组分（25T）
本试剂盒为25次检测规格（25T），组分配比精准、配套齐全，开箱即可开展实验，无需额外配制试剂，保障实验稳定性与重复性，各组分规格如下：
| 组分名称 | 规格 |
| 溶液A | 580μl |
| 溶液B | 25μl |
| 阳性对照 | 15μl |
| 石蜡油 | 700μl |
所有组分均经过严格质控，低温保存稳定性强，按规范储存可保障检测效果，其中溶液A、阳性对照需-20℃避光储存，使用前按需解冻。
三、标准化实验操作流程
为保障检测结果精准可靠，需严格遵循以下操作步骤，全程把控冰上操作、温度控制等核心细节，避免污染与误差。
（1）待测细胞培养液上清制备
选取培养2-3天、融合度≥80%的待测细胞，收集至少200μl细胞培养液；将培养液以200g离心5分钟，离心后吸取上清液用于检测，注意避开管底部50μl培养液及细胞沉淀，防止细胞碎片干扰检测结果。
（2）反应体系配制（冰上操作）
实验前将溶液A、溶液B、阳性对照、石蜡油解冻，解冻后立即置于冰上备用；取出-20℃储存的溶液A，轻轻颠倒混匀，切勿剧烈震荡。
按待测样本数量（N），在冰上配制反应体系，考虑阴性对照、阳性对照及移液器误差，推荐配制N+3个反应体系，单个体系与总体积配比如下：
| 组分 | 单个样品反应体积（μl） | 总体积计算公式（μl） |
| 溶液A | 23 | (N+3)×23 |
| 溶液B | 1 | (N+3)×1 |
体系配制完成后，用振荡器轻轻混匀，分装至200μlPCR管中，每管精准分装24μl混匀反应液，全程保持冰上操作。
（3）样本上样（冰上操作）
上样全程保持冰上操作，石蜡油需提前冰上预冷，严格更换枪头避免交叉污染：
-待测样品：向反应管中加入1μl离心后的细胞上清液，用加样枪轻轻吹打5次混匀；
-阴性对照：不添加样品，或加入1μl无菌水；
-阳性对照：加入1μl阳性对照品，轻轻吹打5次混匀。
上样完成后，每管反应液上方轻轻加入25μl石蜡油（水浴加热模式），防止孵育过程中液体蒸发影响结果；若采用PCR仪孵育，无需添加石蜡油。
（4）恒温孵育反应
将水浴锅（或PCR仪）温度校准至61℃，放入反应管恒温孵育60分钟；建议提前用温度计校准水浴锅实际温度，59-63℃范围内可正常反应，但温度偏差会影响检测灵敏度，严禁使用烘箱、金属浴替代加热设备。反应全程严禁开盖，避免气溶胶扩散导致后续实验假阳性；反应结束后，将反应管密封包扎，丢弃至专用生物垃圾桶并及时清理。
（5）结果判断标准
孵育结束后立即取出反应管，置于室温平衡，在光线良好环境下（以白纸为背景）观察反应液颜色：
-阴性结果：反应液保持蓝紫色，提示细胞培养物无支原体污染；
-阳性结果：反应液变为天蓝色，提示细胞培养物存在支原体污染。
四、试剂应用价值与注意事项
本支原体检测试剂盒适配细胞培养日常质控、科研实验样本筛查、生物制品放行检测等场景，凭借无设备门槛、快速灵敏、操作极简的优势，有效弥补传统检测方法的短板，助力科研人员与生产企业筑牢支原体污染防控防线。
使用时需严格遵循低温操作、温度校准、无菌操作等规范，避免样本交叉污染与温度偏差影响结果；试剂盒组分需按要求低温储存，避免反复冻融，保障检测稳定性与准确性。
更新时间：2026-03-23
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