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密度梯度离心法分离小鼠骨髓间充质干细胞的步骤

发布时间:2022-11-17 点击量:19
  小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分离自骨髓。在骨髓中,BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%,含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高,在培养过程中,受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。
  
  目前用于分离BMSCs的方法主要有五种,分别是贴壁筛选法、骨组织消化法、密度梯度离心法、免疫磁珠分选法和流式细胞仪分离法。
  
  密度梯度离心法是针对骨髓中不同细胞的大小和密度差异进行分选,骨髓细胞悬液加入到密度梯度离心液上面,通过离心使得不同类型细胞沉降至其等密度点,然后吸取特定位置富集的细胞。
  
  常见的梯度离心液有Ficoll、Ficoll-Paque、percoll、Lymphopre等,具有低粘性和低渗透性的特性,使用密度约为1.077g/mL。
  
  在离心分层时,红细胞及多核细胞因比重(1.080g/mL)较大而沉降于底部,其次是单个核细胞(包括BMSCs、造血干细胞、单核细胞等),悬浮密度位于(1.056~1.075)g/mL,血浆及其溶解物悬浮密度位于1.050g/mL。位于分离液之上的灰白色云雾状层即为单个核细胞层,在获取该层细胞后再通过差速贴壁法去除未贴壁细胞。
  
       使用密度梯度离心法分离小鼠骨髓间充质干细胞效果好,但操作严格,不易掌握。 
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