脂肪组织在特定条件下可以释放出一类具有多向分化潜能的细胞，
大鼠脂肪间充质干细胞在基础研究中受到较多关注。获取这类细胞的过程并不复杂，但对操作细节的要求较为严格。以下从准备阶段到原代培养，梳理一套完整的操作流程。
一、前期准备
实验开始前，需要准备好解剖器械、培养皿、离心管以及消化所用的酶溶液。所有器械应经过灭菌处理，操作台面需提前紫外照射。试剂方面，通常需要准备缓冲液、消化酶、血清以及基础培养基。消化酶的浓度和作用时间需要根据组织来源和实验目的进行预实验确定，浓度过高会损伤细胞表面标志，浓度过低则导致组织消化不全、细胞产量下降。
二、组织获取与初步处理
取适量脂肪组织，置于含缓冲液的培养皿中。用器械剔除肉眼可见的血管、筋膜和结缔组织。这一步对后续细胞纯度影响较大，残留的血管内皮细胞和成纤维细胞会与目标细胞竞争生长空间。剔除完成后，用缓冲液反复冲洗组织块，直至冲洗液澄清，以去除血细胞和游离脂滴。
三、机械剪切与酶消化
将清洗后的组织转移至无菌离心管中，用剪刀剪碎至糊状。剪切越充分，消化酶与组织的接触面积越大，消化效率越高。随后加入预先配制好的消化酶溶液，置于恒温摇床中消化。消化期间可每隔数分钟轻轻吹打一次，帮助组织分散。消化结束后，加入含血清的培养基终止反应。血清中的蛋白酶抑制剂可以迅速中和消化酶活性，避免过度消化。
四、离心与重悬
终止消化后，将混合液进行离心。离心速度不宜过高，以免细胞受压损伤。离心后可见管底沉淀，上层为脂肪层和液体层。弃去上层液体和脂肪，用缓冲液重悬沉淀，再次离心洗涤。重复洗涤一次后，用全培养基重悬细胞沉淀。
五、接种与原代培养
将细胞悬液接种至培养瓶中，置于恒温培养箱中静置培养。初次接种后不宜频繁移动培养瓶，以免影响细胞贴壁。培养一段时间后，换液可去除未贴壁的细胞和残留碎片。此后根据培养基颜色变化和细胞生长状态定期换液。当细胞铺展至培养瓶底面积的多数时，可进行传代操作。
六、注意事项
整个操作过程应尽量缩短时间，减少细胞在体外暴露的时长。消化酶的批次差异可能影响结果，建议提前进行小规模预实验。原代细胞在早期传代时增殖能力较强，随着传代次数增加，分化潜能可能逐渐减弱，因此建议在低代次阶段完成相关实验。若需长期保存，可在细胞状态良好时进行冻存，冻存液中应含适宜浓度的保护剂，降温过程需缓慢控制。
更新时间：2026-09-14
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