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小鼠脑微血管内皮细胞的7个实验步骤

发布时间:2020-07-20 点击量:73
  小鼠脑微血管内皮细胞分离自卵巢组织;卵巢是雌性动物的生殖器官,卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同,仅左侧发育(右侧已退化),呈葡萄状,均为处于不同发育时期的卵泡,卵泡呈黄色,卵巢表面密布血管。
  细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。
  实验步骤:
  ① 入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;
  ② 倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热;
  ③ 超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;
  ④ 打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;
  ⑤ 点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管,安上橡皮头,过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内;
  ⑥ 将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上;
  ⑦ 倒掉培养细胞的旧培养基,洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下。
  小鼠脑微血管内皮细胞培养步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。
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