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培养小鼠骨髓内皮祖细胞的三种常用消化酶

发布时间:2022-09-09 点击量:16
  在科研实验中一般用到的现成细胞系/株,我们只需要进行细胞传代和保种。然而,这些细胞系常常由于体外长期培养,而丢失原有生物学特性,对药物处理的反应差距越来越大。
  
  小鼠骨髓内皮祖细胞直接从机体取出的细胞或从组织获得的单个细胞,并可以在体外进行培养。这里的组织主要指:器官、外周血及胚胎等。
  
  小鼠骨髓内皮祖细胞离体时间短,更接近于生物体内的生活状态,且生物性状尚未发生很大改变。因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。
  
  但组织消化过程中常遇到多种问题,例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题,消化酶的选择是关键。本文将为您介绍一些常用的消化酶及其适用组织,供您参考。
  
  1、Trypsin(胰酶)
  
  从牛和人的胰腺中得到的粗提物;通过作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽腱,除去细胞间粘蛋白及糖蛋白,影响细胞骨架,从而使细胞分离。
  
  胰蛋白酶适用于消化细胞间质较少的软组织,如胚胎、上皮、肝、肾等组织。但对于纤维组织和较硬的癌组织的效果差,常常将胰蛋白酶与其他消化酶联合使用。
  
  2、Collagenase(胶原酶)
  
  酶法组织消化中常用的胶原酶,能特异性地降解胞外胶原蛋白,使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离,而不损坏细胞表面结构的完整性。
  
  由于细胞外基质的成分复杂,除胶原蛋白外,还含有弹性蛋白,糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型,不同物种来源,不同年龄的组织中胞外基质组份不同。
  
  所以商业化的胶原酶产品一般是梭状芽孢杆菌裂解液的粗提物,是胶原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物,能降解胶原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物质,适用于多种组织的消化应用。
  
  3、Dispase(分散酶)
  
  Dispase是一种纯化的中性蛋白酶,用于小鼠骨髓内皮祖细胞的制备,由于其温和的特性,细胞外基质的消化,不损伤细胞膜,在消化过程中对细胞造成的损伤极小,它还能用于细胞的次代培养,也可用于细胞悬液中的聚团消化解聚。
  
  提取自多黏芽孢杆菌,杜绝了支原体污染的可能性,在宽泛的pH和温度条件下具有良好的稳定性,因此在组织消化过程中的表现比胶原酶更加稳定。
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