小鼠II型肺泡上皮细胞作为肺组织的关键功能细胞，不仅承担着肺泡表面活性物质（PS）合成与分泌的核心职责，还具备增殖分化为I型肺泡上皮细胞（ATI细胞）的干细胞特性，在肺损伤修复、肺部疾病发病机制研究中具有不可替代的价值。其分离培养技术的优化与功能机制的深入探索，为呼吸系统疾病的基础研究与临床转化提供了重要支撑。
ATII细胞的分离培养需兼顾细胞纯度与活性，核心步骤包括肺组织获取、酶解消化、细胞纯化及体外培养。首先，选取6-8周龄SPF级小鼠，经颈椎脱臼法处死并无菌暴露胸腔，通过气管插管注入胰蛋白酶-胶原酶混合消化液，37℃恒温孵育20-30分钟，使肺组织间质松散、细胞间连接解离。随后，机械吹打肺组织获得单细胞悬液，经100目滤网过滤去除组织碎片，采用差速贴壁法结合免疫磁珠分选技术（针对ATII细胞特异性表面标志物SP-C）纯化细胞，可将细胞纯度提升至85%以上。体外培养时，采用含10%胎牛血清、表皮生长因子（EGF）及胰岛素转铁蛋白硒（ITS）的DMEM/F12培养基，置于37℃、5%CO₂培养箱中，细胞接种后24小时贴壁生长，48-72小时进入对数增殖期，此时细胞形态呈立方状，胞质内可见典型的板层小体（PS储存结构）。
培养体系的优化是保障ATII细胞功能稳定的关键。研究表明，基质胶包被培养皿可模拟肺泡基底膜微环境，显著提高细胞贴壁率与PS分泌能力；添加地塞米松可增强SP-C基因表达，维持细胞分化表型；而避免过高血清浓度（>15%）可减少成纤维细胞污染，防止细胞过度增殖导致功能丧失。此外，体外培养时间不宜超过7天，否则ATII细胞易发生上皮-间质转化或分化为ATI细胞，影响实验结果的稳定性。
ATII细胞的核心功能研究主要集中于三个方面：一是PS合成与分泌调控，其分泌的PS可降低肺泡表面张力、防止肺泡塌陷，该功能异常与新生儿呼吸窘迫综合征、急性呼吸窘迫综合征密切相关；二是增殖分化潜能，在肺损伤后，ATII细胞可通过自我更新并分化为ATI细胞，完成肺泡上皮的修复重建，其分化机制涉及Notch、Wnt等信号通路的调控；三是免疫调节作用，ATII细胞可表达Toll样受体，识别病原体相关分子模式，分泌细胞因子参与肺部炎症反应的调控，在肺部感染与免疫失衡疾病中发挥重要作用。
更新时间：2025-11-13
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