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大鼠软骨细胞的制备方法一起来了解一下

发布时间:2022-04-13 点击量:163
       大鼠软骨细胞是软骨组织中的主要细胞成分。位于软骨陷窝中。软骨细胞的核小,呈圆形或椭圆形,有1至数个核仁,胞质略嗜碱性。细胞形状依软骨组织而异:在透明软骨,靠近软骨膜的细胞呈椭圆形,其长轴与软骨表面平行,深部的细胞逐渐变为圆形或卵圆形,常常两个或多个聚集成群,称为同源细胞群;在弹性软骨,细胞的形态基本上与透明软骨的相似;在纤维软骨,细胞略呈卵圆形,夹在胶原纤维束之间,单个存在、成对存在或排列成单行。
  大鼠软骨细胞制备:
  1)大鼠关节软骨细胞的取材、培养及细胞一般生物活性测定
  取4~5周龄,体重185~200g的SD大鼠,断颈处死,置于5%CO2混和气体环境中,37℃恒温箱内单层培养,隔3d换液,8~10d达85%融合后进行传代。
  2)倒置相差显微镜下形态学观察
  取每代贴壁软骨细胞于倒置相差显微镜观察细胞生长情况。倒置相差显微镜观察:原代软骨细胞9~12h部分贴壁,大部分在24h时完成贴壁,部分细胞开始伸展,细胞体积较小,呈多角形,均匀散在生长,48h内基本上铺展成三角或多角形;7~10d达到90%融合形成单层细胞,细胞仍呈多角形或短梭形,细胞排列紧密,折光性强。
  3)软骨细胞透射电镜观察胰酶消化各代次软骨细胞,离心后先于离心管培养3d,送福建医大电镜室制片观察。经离心管培养3d后,固定标本进行电镜技术观察,原代P0培养软骨细胞为卵圆形或圆形,细胞核清晰,较多异染色质分布于核膜边缘和核内。
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