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小鼠肝细胞的具体实验方法一起来了解一下吧

发布时间:2022-05-20 点击量:133
       小鼠肝细胞通常指小鼠肝实质细胞。在动物体正常生理和病理条件下,肝脏在能量代谢、外源物质的生物转化、基质蛋白的合成、解毒等方面发挥着其重要的作用。肝实质细胞是指具有肝功能的基本组成单位,大约占肝脏体积及数量的80%左右,肝实质细胞具有多方面的功能,例如:蛋白质的合成和储存、分泌胆汁和解毒物质等。肝实质细胞体外常常被用作研究肝脏功能、能量代谢和肝脏疾病的良好模型
  小鼠肝细胞试验方法:
  1.将小鼠断颈致死,置75%酒精泡2-3秒钟,取肝脏,置于盛有PBS的平皿中。
  2.剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物,转移到另一个盛有PBS液的平皿中。
  2.3用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2),玻片研磨,转到离心管,离心(1000rpm,5min)。
  4.视组织或细胞量加入5-6倍(3-5ml)胰酶,37℃中消化20分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。
  5.加入3-5ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。
  6.用100目孔径滤网滤过,除去未消化的大组织块。
  7.再次离心5min,弃上清液。
  8.加入无血清培养液5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。
  9.加入含血清的培养液1-2ml(视细胞量),血球计数板计数。
  10.将细胞调整到5×105/ml左右,转移至6孔培养板中,37℃下培养。
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