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大鼠滑膜细胞的提取方法已整理好,拿走不谢!

发布时间:2022-07-20 点击量:40
  大鼠滑膜细胞分离自滑膜组织。滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构,各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构,同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。
  
  滑膜细胞是构成滑膜层的细胞群体,是维持关节正常功能的重要组织结构,它包埋在颗粒状无定性的基质中,基质内有分散的纤维分布。
  
  目前已经建立的大鼠滑膜细胞分离培养方法多以酶消化法为主,分离得到的细胞纯度不高,并且培养时间较长。下面小编就分享滑膜细胞的提取方法。
  
  1、大鼠经麻醉,腹主动脉取血处死后,用酒精对膝关节进行局部消毒,于膝关节正中纵行切开皮肤,分离肌肉,露出膝盖骨,继续向下分离,可见平滑光亮的滑膜组织,用手术剪分离关节囊的滑膜层和纤维层,然后取出滑膜,同法采集另一个膝关节滑膜。
  
  2、将滑膜放入装有PBS的EP管中,上下颠倒清洗,弃去PBS,重复两次。
  
  3、在EP管中用手术剪将滑膜尽量剪碎,用胰酶消化15~20min,加入2倍量的无血清培养基终止消化,去除培养基,再加入2倍量的培养基,将胰酶完全除去。
  
  4、把滑膜移到25mLflask中,尽量使滑膜平铺在瓶底,避免因重叠而贴壁不牢,易被培养基冲起,将flask直立放入细胞培养箱中孵育3h。
  
  5、取出flask,加入完全培养基后,将flask平放于细胞培养箱中。
  
  6、隔日观察组织贴壁情况。若有轻微污染,更换培养基,观察。

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