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实际操作大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养

发布时间:2022-08-18 点击量:51
  大鼠脂肪间充质干细胞是来源于脂肪组织的干细胞,与其它成体干细胞一样具有自我更新和多向分化的能力。人和鼠的脂肪组织均可用于分离ADSCs,其中鼠脂肪组织通常取自腹股沟处脂肪垫。
  
  大鼠脂肪间充质干细胞的实验步骤:
  
  1、10天龄到4周龄大鼠1只,麻醉处死,75%乙醇浸泡消毒3~5min。无菌条件下切开腹股沟皮肤,暴露腹股沟脂肪垫。
  
  2、钝性剥离脂肪组织,清洗并去除筋膜组织及小血管。将脂肪垫剪碎,转移至15mL离心管中。
  
  3、加入3~4倍体积的0.1%I型胶原酶溶液,37℃水浴振荡约20min,直至细胞混合物成乳状浓稠液体。期间可吹打脂肪组织,辅助消化。
  
  4、250×g,4℃,离心5min。注意离心机预冷至4℃。
  
  5、小心吸去上层油脂,注意不要破坏位于下方的胶状沉淀。加人5mL完全培养基,重悬沉淀,转移到新的离心管中,再次离心5min。
  
  6、重复洗涤一次,吸去上清。
  
  7、加入8mL完全培养基重悬沉淀,转移至T25培养瓶中,置于37℃,5%CO2温箱中。
  
  8、待细胞贴壁生长48h后初次观察、换液。
  
  9、换液时通过弃去培养基,从而去除未贴壁的细胞。
  
  10、以后每两天更换一次培养基,细胞汇合达80%-90%时,0.25%胰蛋白酶消化,按1:2或1:3比例首次传代。
  
  大鼠脂肪间充质干细胞注意事项:
  
  1、取材时应将组织清洗干净,仔细剥离去除血管和筋膜组织。
  
  2、脂肪组织在剪碎的过程中不能研磨,以免破坏细胞。
  
  3、消化完后的组织在离心前把离心机预冷,使细胞更好的与油脂分离。
  
  4、用明胶或者胶原蛋白处理培养皿底壁,有利于细胞的贴壁生长。
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